快盈IV 1　HPLC分析の概念/ HPLC分析的概念

快盈IV HPLCとはHigh Performance Liquid Chromatographyの略で、日本語では高速液体クロマトグラフと呼びます。なお、クロマトグラフィーは測定方法、クロマトグラムは測定結果、クロマトグラフは装置を指します。Tswettの実験で使用したオープンカラムは、技術の発展によって専用のカラムが開発されました。一定の速度でカラムに液体を送液するポンプも開発され、一つの分析システムとして高性能化したことで、High Performance Liquid Chromatography（HPLC）と表記されるようになりました。簡単にはLCと記載されることもあります。現在は、さらに高性能化が進み、高速分析が可能になったUltra high performance liquid chromatography（UHPLC）も用いられています。HPLCの分析対象は液体中に溶解している成分です。液体試料に溶解している化合物を分離し、どのような成分がどれくらい含まれているかを定性・定量分析することができます。図1に、HPLCの概念を示します。HPLCの分析で、液体試料内の成分を分離のために流す液体を移動相と呼びます。移動相は送液ポンプにより、カラム（固定相）から検出器へ一定速度で流れていきます。複数の成分が混合した試料をカラムに注入し、カラム内で分離します。カラム出口に設置した検出器でモニターし、成分を定性・定量分析します。

HPLC是High Performance Liquid Chromatography的缩写，日语中称为高速液相色谱仪。注意，色谱是指测定方法，色谱图是指测定结果，色谱仪是指设备。随着技术的进步，Tswett 实验中使用的开放式柱已被专用柱所取代。还开发了一种泵，用于以恒定的速度将液体输送到色谱柱，并且系统的性能得到提高，直到被称为高效液相色谱法 (HPLC)。有时也简称为 LC。目前正在使用的超高效液相色谱法 (UHPLC) 更加复杂，可以进行高速分析。 HPLC 的分析对象是溶解在液体中的成分。可以分离溶解在液体样本中的化合物，并进行定性和定量分析，以确定存在哪些成分以及含量。图 1 显示了 HPLC 的概念。在 HPLC 分析中，承载液体样品中成分并将其分离的液体称为流动相。流动相通过泵以恒定的速率从色谱柱（固定相）流到检测器。将含有多种成分混合物的样品注入柱中，然后在柱中分离。使用安装在塔出口的检测器监测各组分，并进行定性和定量分析。

2　HPLCの装置構成/ HPLC设备配置

HPLCの概念（図1）ではHPLCの仕組みを模式図的に示しましたが、実際のHPLCは、送液ポンプ、脱気装置、試料導入装置、カラムオーブン、検出器およびデータ処理装置といった様々なコンポーネントで構成されています。図2にHPLCの装置構成の概略および各コンポーネントの役割を示します。

快盈IV HPLC 概念（图 1）显示了 HPLC 的工作原理示意图，但实际的 HPLC 需要各种组件，例如液体输送泵、脱气器、进样装置、柱温箱、检测器和数据处理设备。它由以下组件组成：图 2 显示了 HPLC 系统配置概述以及各个组件的作用。

快盈IV HPLCでは送液ポンプを用い、移動相を一定流量で送液します（a）。我々が生活している大気圧の条件下は移動相に気体が混入（溶存）しやすい環境です。気体が溶存した移動相を送液ポンプが吸引すると気泡が発生し、流量変動やベースラインのノイズ/ドリフトなどのトラブルが生じます。トラブルを防ぐため、送液ポンプの上流には脱気装置を設置します(b)。 溶存気体が除去された移動相はカラムに送液され、試料導入装置でカラムに導入します(c)。カラムでの成分分離は周囲の温度変化の影響を受けます。周囲の温度環境を一定にするため、カラムはカラムオーブン内で温調します(d)。カラムから溶出した成分は、カラム出口に設置した検出器でモニターします(e)。データ処理装置は、検出器から送られてくる信号を処理して、クロマトグラムを出力し、定性、定量のためのデータ処理を行います(f)。このような流れでHPLC分析の結果が得られます。

快盈IV 在 HPLC 中，使用泵以恒定流速 (a) 输送流动相。我们生活的大气压条件是气体很容易混合（溶解）在流动相中的环境。当泵吸入含有溶解气体的流动相时，就会产生气泡，从而引起流速波动和基线噪声/漂移等问题。为了防止出现问题，在液体输送泵（b）的上游安装了一个脱气装置。除去了溶解气体的流动相被送至色谱柱，并通过进样装置（c）引入色谱柱中。塔中的组分分离受周围温度变化的影响。为了保持恒定的环境温度，将柱子放入柱温箱 (d) 中加热。从色谱柱洗脱出的组分由安装在色谱柱出口 (e) 处的检测器监测。数据处理单元对检测器送来的信号进行处理，输出色谱图，并进行定性和定量分析的数据处理（f）。这就是获得HPLC分析结果的方法。

3　HPLCにおける分離メカニズム/ HPLC 的分离机理

快盈IV HPLCの使用により、さまざまな成分が分離できるのは、各成分がカラム内を移動する速度が異なるためです。図3にHPLCにおける分離のメカニズムを示します。カラムの中では成分と移動相との相互作用（引き合う力）が強ければ、その成分は移動相の流れに乗ってカラムの中を速く移動し、早く溶出します。一方、固定相との相互作用が強ければ、移動相の流れに乗りにくいためカラムの中をゆっくり移動します。図3では、黄色の成分が移動相との相互作用が強く、早く分離・溶出され、ピンクの成分が固定相との相互作用が強く、遅く分離・溶出される、の例を示しています。このように、カラムの中を進む各成分の速度の違いがHPLCにおける分離のメカニズムです。

使用 HPLC，可以分离不同的成分，因为每种成分以不同的速率通过色谱柱。图3显示了HPLC的分离机制。如果色谱柱内某种组分与流动相之间的相互作用（吸引力）强，那么该组分就会随着流动相的流动而更快地流过色谱柱，从而更快地被洗脱出来。另一方面，如果与固定相的相互作用很强，它将不容易被流动相携带并会缓慢地穿过色谱柱。图3所示的例子中，黄色组分与流动相相互作用强，较早分离和洗脱，而粉色组分与固定相相互作用强，较晚分离和洗脱。这样，各个组分通过色谱柱的速度差异就是 HPLC 分离的机制。

快盈IV 4　クロマトグラムの読み方/4. 如何读色谱图

HPLCによる分離の結果を示すグラフをクロマトグラムといいます。図4にクロマトグラムの読み方を示します。カラムから何も溶出しないときには時間軸（横軸）と平行な直線が描かれます。これをベースラインと言います。カラムの中で相互作用をした成分が溶出すると、ベースラインの上に山のような盛り上がりが現れます。これがピークです。カラムに成分が留まることを保持と呼び、分析のスタート（試料をカラムに注入）からピーク頂点までの時間を保持時間（tR）といいます。カラム内で固定相と相互作用せず、カラムを素通りした時間を非保持の時間（t0）といいます。ピークの頂点から垂線を引いた時の距離をピーク高さ（h）、水色に塗りつぶされた部分の面積をピーク面積（A）といいます。これらの結果を用いて、試料成分の定性および定量に用います。

快盈IV 显示 HPLC 分离结果的图表称为色谱图。图4显示了如何读取色谱图。当没有任何东西从柱中洗脱出来时，会画一条与时间轴（横轴）平行的直线。这被称为基线。当与色谱柱相互作用的组分被洗脱时，基线上方就会出现山状凸起。此为巅峰。组分在色谱柱中的保留时间称为保留时间，从分析开始（将样品注入色谱柱）到峰顶点的时间称为保留时间（tR）。物质通过色谱柱而不与色谱柱内固定相发生相互作用的时间称为非保留时间（t0）。从峰顶点引一条垂直线时的距离称为峰高（h），淡蓝色部分的面积称为峰面积（A）。这些结果用于定性和量化样品成分。